羅氏Hygromycin B（潮霉素B）*公告

更新時間：2013-07-24

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產品名稱 : Hygromycin B 潮霉素B

品牌 : Roche

貨號 : 10843555001

規格 : 1 g （20 ml） sterile-filtered

詳細信息 :

原價1933元

*規則：單個950元，3個以上880元

時間：2012,8月8日到2013年3月31日

作用機制：

潮霉素B是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。

抗性基因：

對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉移酶（Hph）的基因。至今發現兩種來源：

Streptomyces hygroscopicus產生的Hph抗性基因；

Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae內質粒攜帶的Hph抗性基因（常用）；

生物應用：

1）篩選和維持培養穩定轉染Hph⁺載體的原核細胞或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）；

2）由于作用模式的差異，常與G418 （Geneticin^TM），Zeocin™和blasticidin S聯合使用，篩選穩定轉染兩個不同載體的細胞株；

3）抗病毒劑，由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，而且具有抑制翻譯的功效；

4）作為驅蟲藥加入動物飼料；

應用濃度：

潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL，*濃度需要殺滅曲線來確定。

哺乳動物細胞·200-500 μg/mL；細菌/植物細胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000μg/mL；

產品使用：

使用一：殺滅曲線確定*殺死濃度（僅作參考，因個人檢測體系而異）

（1）往組織培養級的96孔板內加入未轉染細胞，細胞密度約50-200細胞/孔；細胞貼壁之后，往每孔加入含不同濃度（如50-1000μg/mL，至少5個濃度）潮霉素B的200μL新鮮培養基；

（2）37℃，5% CO₂培養箱孵育細胞10-14天；

（3）培養5-7天后更換新的培養液，培養液內含有相應濃度的潮霉素B；

（4）10-14天后使用細胞增殖方法如MTT，CCK-8等評估細胞活力；也可以通過檢測細胞克隆數或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的zui小濃度為*篩選濃度。

使用二：篩選穩定轉染細胞

（1）對于貼壁細胞，直接吸去60mm培養皿內的轉染細胞培養基，然后加入含有潮霉素B的新鮮培養基5-6ml；對于懸浮細胞，無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉染細胞培養基，然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養基；

（2） 5-7天后，如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養基；

（3）再孵育細胞5-7天；

（4） 10-14天孵育后，培養體系中只含有能夠表達潮霉素B抗性表型的活細胞。因此篩選之后如步驟一，更換不含潮霉素B的新鮮培養基。

應用實例：

保存方法：溶液直接存放在2℃～8℃，至少存放1年。

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