50~100 mL 細菌培養液中純化400 μg高純度質粒DNA

1. 質粒拷貝數：純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer.
2. 轉化菌：若為-70^oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
3. 柱結合能力：450 μg

1. 取100 µL新鮮的菌液接種到15-80 mL （勿超過 100 mL）的LB培養基（含適量抗生素），37^oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
2. 加入5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
3. 加入5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
4. 加入6 mL Buffer C1, 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
5. 將離心管轉至高速離心機，在室溫下14,000 x g 離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。
6. 小心吸取離心后的上清液至50 mL管中（避免吸起沉淀），加入6 mL 100% 乙醇，立即搖勻，需馬上離心過DNA柱。
7. 立即轉移6.0 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
8. 可選: 向DNA柱中加入4.0 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
9. 向離心柱中加入5.0 mL 70% 乙醇，室溫下>2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
10. 將離心柱放回高速離心機中，室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。
11. 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5-1 mL滅菌ddH₂O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置1分鐘，>2,500 x g離心5分鐘，以洗脫質粒DNA。若想提高得率，將15 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間，>2,500 x g離心5分鐘以洗脫質粒DNA。

操作流程：