| 試劑盒組成： | Catalog Number | PD1220-01 | | Preps | 50 | | ezBind Columns | 50 | | Buffer A1 | 15 mL | | Buffer B1 | 15 mL | | Buffer N3 | 4 mL | | Buffer KB | 30 mL | | Buffer RET | 30 mL | | DNA Wash Buffer* | 15 mL | | Endofree Elution Buffer | 10 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 1.5 mg（75 µL） | | User Manual | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項： - 質粒拷貝數: 純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
- 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
- 切勿直接取凍存的菌進行培養。
操作簡明步驟： - 接種新鮮的單個菌落到3-5 mL的LB培養基 （含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時。
- 室溫下10,000 x g離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入250 µL Buffer A1 （確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
- 加入 250 µL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入60 µL Buffer N3, 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉至高速離心機，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中仍有白色沉淀，可再次離心）。
- 定量吸取離心后的上清液至新的1.5 mL管中，加入1倍體積的Buffer RET, （如500 µL裂解液加入到500 µL的上清液）及250 µL的100% ethonal，用手用力甩3次以混勻。
- 將溶液700 µL轉移至帶有收集管的DNA柱中，室溫下13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。再重復此步驟至全部溶液轉移至DNA柱中。
- 可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入500 µL DNA Wash Buffer（確保已加入無水乙醇），室溫下，13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“10”。
- 將離心柱放回高速離心機中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以*去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉至一個新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入50~100 µL（體積>50 µL）的EndoFree Elution Buffer，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，收集洗脫液到同一個離心管中。
操作流程： |
更新時間：2013-01-07 
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