1. 質(zhì)粒拷貝數(shù): 純化中低拷貝的質(zhì)粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
2. 轉(zhuǎn)化菌: 若為-70^oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個菌落進行培養(yǎng)。
3. 切勿直接取凍存的菌進行培養(yǎng)。

1. 接種新鮮的單個菌落到3-12 mL的LB培養(yǎng)基 （含適量抗生素），37^oC震蕩培養(yǎng)14-16小時。
2. 室溫下13,000  rpm 離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
3. 加入450 µL Buffer A1 （確保已加入RNase A） ，用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
4. 加入 450 µL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
5. 加入預(yù)冷的80 µL Buffer N3（或加入到裂解液后在冰上放置1分鐘將有利于減少蛋白漂?。? 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
6. 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中仍有白色沉淀，可再次離心）。
7. 定量吸取離心后的上清液至新的1.5 mL管中，加入1倍體積的Buffer RET, （如900 µL裂解液加入到900 µL的上清液）及400 µL的100% ethonal，充分顛倒混勻。
8. 將溶液700 µL轉(zhuǎn)移至帶有收集管的DNA柱中，室溫下13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步驟至全部溶液轉(zhuǎn)移至DNA柱中。
9. 可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
10. 向離心柱中加入500 µL DNA Wash Buffer（確保已加入無水乙醇），室溫下，13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“10”。
11. 將離心柱放回高速離心機中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以*去除殘留的乙醇。
12. 將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入50~100 µL（體積>50 µL）的Endofree Elution Buffer，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質(zhì)粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，收集洗脫液到同一個離心管中。

操作流程：