瓊脂糖凝膠小量回收試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明

更新時(shí)間：2013-01-08

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備注：本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗(yàn)

DNA Gel/PCR Purification Miniprep kit
概述 :瓊脂糖凝膠小量回收試劑盒

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編號(hào): DC3511-01		資料下載
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說(shuō)明 :

產(chǎn)品說(shuō)明：

本試劑盒可以簡(jiǎn)單、快速、的從瓊脂糖凝膠或PCR反應(yīng)產(chǎn)物中回收DNA，有效純化長(zhǎng)度在100bp-20kb的片段，回收率高達(dá)80-90%。

保存條件：

Buffer GC應(yīng)避光保存，其他組分室溫保存。

使用前請(qǐng)注意：

使用前請(qǐng)分別在DNA Wash Buffer中加入8 mL （DC3511/DC3514-00）或者60 mL（DC3511/DC3514-01）或者96 mL （DC3511/DC3514-02）或者60 mL （DC3511/DC3514-03） 100% 乙醇。
溶解100 mg的瓊脂糖凝膠，約需要100 µL Buffer GC。
溶膠液GC 在較低溫度下易沉淀，若溫度較低，出現(xiàn)沉淀，使用前請(qǐng)?jiān)?7 ^oC加熱幾分鐘，至沉淀溶解后再使用。
本試劑盒所有操作步驟均在室溫下進(jìn)行。

用戶自備材料:

PCR產(chǎn)物純化/膠回收離心法操作步驟：

1. PCR產(chǎn)物純化：在1倍體積的PCR反應(yīng)物中加入2倍體積的 Buffer GC，渦旋充分混勻。對(duì)小于200 bp的PCR產(chǎn)物，加入5倍體積的Buffer GC。

膠回收：將含DNA的瓊脂糖凝膠切下，轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC （100 mg的凝膠加入100 µL Buffer GC）。在55-60 ^oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解*，放置使其冷卻至室溫。

建議:

為取得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)使用新鮮配制的電泳緩沖液制膠和電泳。

切膠時(shí)，盡量縮短在紫外燈下照射的時(shí)間，以減少紫外對(duì)DNA的損傷，并盡量切除不含DNA的凝膠。

若DNA小于200 bp，請(qǐng)加入1體積的異丙醇。

2. 轉(zhuǎn)移700 µL DNA/Buffer GC 混合溶液至離心柱中，室溫下，13,000 x g下離心1分種，棄廢液，將離心柱放回收集管中。重復(fù)此步使剩余的溶液通過(guò)柱子。

3. 加入300 µL of Buffer GC到離心柱中，室溫下13,000 x g離心30-60 秒，棄廢液。

4. 加入650 µL DNA Wash Buffer （確保已將乙醇按說(shuō)明書(shū)要求加入DNA Wash Buffer中），室溫下在13,000 x g下離心30秒，棄廢液。重復(fù)步驟4。

4. 13,000 x g開(kāi)蓋再次離心3分鐘，以去除柱中殘余的乙醇。

注意：此步操作對(duì)DNA的產(chǎn)率多少極為關(guān)鍵。

5. 將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入在60^oC 下預(yù)熱的30-50 µL Elution Buffer或ddH₂O。在室溫下放置1分鐘。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。將洗脫液重新上柱，再次離心洗脫。

建議: 將洗脫緩沖液預(yù)熱到65 ^oC，加洗脫液后將柱子整個(gè)溫育5分鐘后再離心洗脫可以增加DNA回收效率。

對(duì)大于8kb的片段，加洗脫液后將柱子整個(gè)溫育15-30分鐘可以提高回收效率。

PCR產(chǎn)物純化/膠回收真空/離心法操作步驟

1. 將含DNA的瓊脂糖凝膠切下，轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC（100 mg的凝膠加入100 µL Buffer GC）。在55-60^oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解*，放置使其冷卻至室溫。

2. 準(zhǔn)備真空裝置，將柱子與歧管連接。

3. 將 DNA/Buffer GC 混合溶液轉(zhuǎn)移至離心柱。

4. 打開(kāi)真空裝置，溶液流下。

5. 加入650 µL的DNA Wash Buffer漂洗離心柱。

6. 重復(fù)步驟5。再真空抽2分種。

7. 將柱子放入收集管，開(kāi)蓋在zui高速離心2分種以除去乙醇。

8. 將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入30-50 µL Elution Buffer或ddH₂O。在室溫下放置1分種。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。

操作步驟：

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