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備注：本公司銷售的所有產品僅用于生化科研試驗

英文名稱：DNA Gel/PCR Purification Maxiprep kit  

中文名稱 :瓊脂糖凝膠DNA /PCR產物大量回收試劑盒

編號： DC3531-01

規格: 10次

品牌：biomiga

膠回收/PCR產物純化簡明步驟（DC3531）

使用前請注意：

l          使用前請分別在DNA Wash Buffer中加入8 mL （DC3531-00） 或者60 mL（DC3531 -01） 或者96 mL （DC3531-02） 或者60 mL （DC3531-03） 100% 乙醇。

l          溶解100 mg的瓊脂糖凝膠，約需要100 µL Buffer GC。

l          溶膠液GC 在較低溫度下易沉淀，若溫度較低，出現沉淀，使用前請在37 ^oC加熱幾分鐘，至沉淀溶解后再使用。

l          本試劑盒吸附柱吸附能力為80µg，所有操作步驟均在室溫下進行。

用戶自備材料:

R   100% 乙醇

R   臺面離心機和1.5 mL 微型離心管

R   55-60 ^oC 水浴（膠回收時用）

R   真空裝置（真空步驟時用）

R   小于200 bp的片段的可加異丙醇。

PCR產物純化/膠回收離心法操作步驟：

1.        PCR產物純化：在1倍體積的PCR反應物中加入2倍體積的 Buffer GC，渦旋充分混勻。對小于200 bp的PCR產物，加入5倍體積的Buffer GC。

  膠回收：將含DNA的瓊脂糖凝膠切下，轉至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC （100 mg的凝膠加入100 µL Buffer GC）。在55-60 ^oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解*，放置使其冷卻至室溫。

建議: 

R   為取得的實驗結果，請使用新鮮配制的電泳緩沖液制膠和電泳。

R   切膠時，盡量縮短在紫外燈下照射的時間，以減少紫外對DNA的損傷，并盡量切除不含DNA的凝膠。

R   若DNA片段小于200 bp，請加入1體積的異丙醇。

2.        轉移700 µL DNA/Buffer GC 混合溶液至離心柱中，室溫下，13,000 x g下離心1分種，棄廢液，將離心柱放回收集管中。重復此步使剩余的溶液通過柱子。

3.        加入300 µL of Buffer GC到離心柱中，室溫下13,000 x g離心30-60 秒，棄廢液。

4.        加入650 µL DNA Wash Buffer （確保已將乙醇按說明書要求加入DNA Wash Buffer中），室溫下在13,000 x g下離心30秒，棄廢液。重復步驟4。

4.        13,000 x g開蓋再次離心3分鐘，以去除柱中殘余的乙醇。

注意：此步操作對DNA的產率多少極為關鍵。

5.        將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入在60^oC 下預熱的50-100 µL （>50 µL） Elution Buffer或ddH₂O。在室溫下放置1分鐘。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。將洗脫液重新上柱，再次離心洗脫。

建議: 將洗脫緩沖液預熱到65 ^oC，加洗脫液后將柱子整個溫育5分鐘后再離心洗脫可以增加DNA回收效率。

對大于8kb的片段，加洗脫液后將柱子整個溫育15-30分鐘可以提高回收效率。

PCR產物純化/膠回收真空/離心法操作步驟

1.       將含DNA的瓊脂糖凝膠切下，轉至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC（100 mg的凝膠加入100 µL Buffer GC）。在55-60^oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解*，放置使其冷卻至室溫。

2.        準備真空裝置，將柱子與歧管連接。

3.        將 DNA/Buffer GC 混合溶液轉移至離心柱。

4.        打開真空裝置，溶液流下。

5.        加入650 µL的DNA Wash Buffer漂洗離心柱。

6.        重復步驟5。再真空抽2分種。

7.        將柱子放入收集管，開蓋在zui高速離心2分種以除去乙醇。

將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入50-100 µL （>50 µL）Elution Buffer或ddH₂O。在室溫下放置1分種。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。